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绿色无公害农产品的标准
来源:        发表时间:2010-01-29
1、主题内容与适用范围
  本标准规定了食用菌中粗蛋白质含量的测定方法。
  本标准适用于食用菌中粗蛋白质含量的测定。
2、引用标准
GB 12530 食用菌取样方法
GB 12531 食用菌水分测定
3、方法提要或原理
  采用半微量凯氏定氮法,即在加速剂存在下,以硫酸破坏样品中有机物,加碱蒸馏,滴定所释放的氨,计算出其含氮量。含氮量乘上换算系数6.25即得样品的粗蛋白质量。菇类可消化蛋白质是粗蛋白的70%左右,含氮量乘上4.38,即为可消化蛋白质的含量。
4、试剂
  分析中,除另有说明,均限用分析纯试剂、蒸馏水或相当纯度的水。   
4.1 硫酸(GB 625):分析纯或化学纯,密度1.84g/mL。
4.2 盐酸(GB 622):密度1.18g/mL。
4.3 氢氧化钠溶液:浓度400g/L,用分析纯或化学纯氢氧化钠(GB 629)配制。   
4.4 硼酸(GB 628)溶液:浓度20g/L,为蒸馏时的吸收液。   
4.5 加速剂:将600g硫酸钾(HG 3—920)和100g五水合硫酸铜(GB 665 CuSO4·5H2O)混匀,充分研磨后过40目筛,试剂瓶内密封保存。
4.6 盐酸标准溶液:浓度0.05mol/L或0.1mol/L,用无水碳酸钠或邻苯二甲酸氢钾标定其浓度,精确到小数点后第四位。   
4.7 甲基红-溴甲酚绿混合指示剂:50mL浓度为2g/L的溴甲酚绿(HG 3—1220) 95%乙醇(GB 679)溶液和10mL浓度为2g/L的甲基红(HG 3—958)95%乙醇溶液混合。
5、仪器、设备   
5.1 电热鼓风干燥箱。   
5.2 小型植物粉碎机:备有1mm孔径的金属筛网。   
5.3 分样筛:备有孔径0.42mm(40目)和孔径0.84mm(20目)筛子。   
5.4 玻璃研钵:备有研杵。   
5.5 广口瓶:带磨口。   、
5.6 剪刀和小刀。   
5.7 分析天平:感量0.0001g。   
5.8 扭力天平。   
5.9 可调电炉:0~600℃。   
5.10 通风橱。   
5.11 消煮架:铁制,可使凯氏瓶在消煮时与垂直方向成30°~45°角。   
5.12 硬质凯氏瓶:容积100mL。   
5.13 半微量凯氏定氮蒸馏装置。   
5.14 半微量滴定管:10mL。   
5.15 弯颈三角漏斗:直径25mm。   
5.16 锥形瓶:250mL。
6、样品   
6.1 取样方法和数量
6.1.1 干制品(蘑菇干片、干香菇、黑木耳和银耳等)按GB 12530中规定要求进行。总量不得少于100g。
6.1.2 鲜菇在每批不同的地方随机取样作为原始样品,总量不得少于1000g。   
6.2 试样的制备
6.2.1 干品直接用剪刀剪成小块,在80~100℃干燥箱中烘至发脆后冷却,立即用小型植物粉碎机粉碎。弃去开始粉碎出的样品(约占总样十分之一)。粉碎过的样品均需过40目筛。未能过筛部分再次粉碎或经研钵内研磨之后再过筛,直至全部样品过筛为止。银耳和木耳样品因质地关系经粉碎后大部分样品不能过40目筛,故要求全部样品过20目筛,过筛后的样品装入清洁的广口瓶内保存备用。样品密封后填写标签,注明品名、日期、交样单位和取样人等。
6.2.2 鲜菇取样后立即切成4mm厚度的菇片,鲜耳则用手撕成小块均匀地摊在干燥箱内垫有纱布的铁丝网上,50℃鼓风干燥6h以上。待样品半干后再逐步提高温度至80~100℃。样品发脆之后冷却,立即用粉碎机粉碎。其他操作同干品。
7、分析步骤   
7.1 称样:称取试样0.3~0.5g(蘑菇、香菇、草菇和平菇等高蛋白质的样品为0.3g,木耳、银耳和茯苓等低蛋白质含量的样品则为0.5g),精确到0.0001g。同时按GB 12531中规定的方法称样测定试样的含水量。   
7.2 消煮:试样无损地倒入凯氏瓶中,加入加速剂粉末(4.5)3.5g,混匀,最后加入浓硫酸(4.1)5mL,轻轻摇动凯氏瓶使试样完全湿润。消煮时利用消煮架将凯氏瓶斜放在电炉上加热。瓶口加弯颈三角漏斗。开始时缓慢地加热,待瓶内硫酸液沸腾后,调节电炉温度,防止泡沫冲到凯氏瓶颈上。经常旋转凯氏瓶,直至有机物完全炭化、泡沫消失为止。随后用猛火加热,使溶液不断处于沸腾状态。溶液变清呈绿色之后继续加热0.5h后结束。整个过程在通风橱内进行。   
7.3 蒸馏:装好半微量定氮蒸馏装置。使用前用蒸馏水冲洗干净。在蒸气发生瓶内加入2/3~3/4容积的蒸馏水。将冷凝管下端插入盛有10mL硼酸吸收液(4.4)的250mL锥形瓶液面下,吸收液中预先加入5~6滴混合指示剂(4.7)。通电加热,待蒸气产生后开始蒸馏。从加样口将凯氏瓶中消煮好的样品液倒入,并用蒸馏水冲洗凯氏瓶数次,确保样品全部加入。立即加入氢氧化钠溶液(4.3)20mL,使样品溶液呈强咸性。加样口盖塞封闭,通入蒸气,使反应室内蒸馏液猛烈沸腾,释入出的氨被吸收液所吸收,待吸收液开始变绿色之后继续蒸馏5~6min,吸收液总量达100mL左右时停止蒸馏。   
7.4 滴定:取出吸收瓶,用盐酸标准液(4.6)将吸收液由蓝绿色滴定至灰紫色为终点。   
7.5 空白试验:不加试样的加速剂和浓硫酸作为空白样品,按上述步骤同时进行测定。空白试验所消耗的盐酸标准溶液体积须小于0.25mL。
8、分析结果的计算   
8.1 计算   粗蛋白质(干基,%)=〔c(V2-V1)×0.014×6.25〕/〔m(1-X)〕×100
式中:c── 盐酸标准溶液的浓度,mol/L;
V1── 空白试验滴定消耗的盐酸标准溶液体积,mL;
V2── 样品滴定消耗的盐酸标准溶液体积,mL;
   m── 样品的质量,g;
   0.014── 氮的摩尔质量,g/m mol;
   X── 样品含水量,%;
   6.25── 氮换算成粗蛋白质的系数。   
8.2 允许差
  取平行测定结果的算术平均值为测定结果,保留小数后一位。
  平行测定结果的绝对差值不大于0.2%。